Fluorescence fluctuation of an antigen–antibody complex: circular dichroism, FCS and smFRET of enhanced GFP and its antibody

文献情報

出版日 2015-08-28
DOI 10.1039/C5CP04908C
インパクトファクター 3.676
著者

Debmalya Bhunia, Rajdeep Chowdhury, Kankan Bhattacharyya


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要旨

The structure and dynamics of an antigen–antibody complex are monitored by circular dichroism (CD) spectroscopy, fluorescence correlation spectroscopy (FCS) and single molecule FRET (smFRET). In this work, the antigen is enhanced GFP (EGFP) and the antibody is anti-EGFP VHH-His6. From FCS measurements, the hydrodynamic radius (rH) of EGFP and its antibody (VHH-His6) is found to be 24 ± 2 Å and 18 ± 2 Å, respectively. For the antigen–antibody complex (EGFP:anti-EGFP VHH-His6), rH is 41 ± 3 Å. CD spectra indicate that the addition of guanidium hydrochloride (GdnHCl) causes unfolding of the antigen, its antibody and their complex, and a consequent increase in size is observed from FCS data. smFRET between EGFP (donor, D) and Alexa 594 (acceptor, A) bound to anti-EGFP VHH-His6 reveals a time dependent fluctuation in donor–acceptor distances. This suggests that the structure of the antigen–antibody complex is dynamic in nature and is not rigid.

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掲載誌

Physical Chemistry Chemical Physics

Physical Chemistry Chemical Physics
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自己引用率: 10.3%
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